Методи за култивиране анаероби методи за създаване анаеробни условия
техники за отглеждане анаероби
Начини за създаване на анаеробни условия
а) механично - отстраняване (евакуиране) въздуха от анаеробни чрез вакуумно всмукване. Анаеробните след това се напълва с газова смес, която се състои от 80% азот, 10% водород и 10% въглероден диоксид;
б) Химическо - поглъщане на кислород поради химикали (алкален разтвор на пирогалол, сода);
в) биологична (метод Fortner) - ко-култивиране на анаеробно и аеробно. Така в една петриева паничка с гъста хранителна среда (най-често се използва Tseysslera среда) се инокулира с култура от анаеробни бактерии, до другия - културата на аероби, които могат да абсорбират кислород енергично. Както се използва аероби чудесен коли култура (Serratia marcescens). Parafiniruyut ръб на блюдото на Петри;
г) физикохимичните - засяване на изпитвания материал за специална среда за анаероби, например, среда коте Tarotstsi и Wilson-Blair (железен сулфит агар). Среда преди засяване регенерирана (загрява на парна баня в продължение на 15 минута) за отстраняване на кислорода.
Състав на околната среда Kitty Tarotstsi:
-чернодробни парчета - за адсорбция кислород;
-1% глюкоза - за анаеробна гликолиза;
-полутвърд агар - не позволява на кислород в интериора околната среда.
Първи чиста култура от анаероби
1. Метод Weinberg (metodrazvedeny)
За да се получат изолирани колонии от анаеробна среда коте Tarotstsi с растежа на анаеробни бактерии култура приема с пипета на Пастьор запечатани краища и последователно се потапя в първия пипета тръба 3 с физиологичен разтвор, и след това - 3 тръби с полутвърдите разтопената захар IPA. След инкубиране при 37 0 ° С в миналото наблюдава растеж на анаеробни бактерии, изолирани колонии.
2. Метод Перец.
Един от последното разреждане на Weinberg в полутвърда агар се излива в блюдо на Петри капак и затваря дъното, така че да се отстрани въздуха. Parafiniruyut ръб на блюдото на Петри. Посяване на изпитвания материал на средни Tseysslera секторите, последвано от култивиране на анаеробни.
Тестови задачи ЗА ПРОВЕРКА НА ЗНАНИЕТО
Посочете всички правилните отговори:
1. За култивирането на анаеробни бактерии използвани среда без анаероб:
а) кръвен агар;
б) вителиновата сол агар;
2. В анаеробно дишане тип бактерии не е група от ензими:
3. Крайният акцептор на електрони от аеробно дишане на тип бактерии е:
а) молекулен кислород;
б) неорганични съединения;
в) органично съединение;
г) едновременно органични и неорганични съединения;
г) митохондриални протеини.
4. Сред тиоглиловова служи да подчертае:
а) задължи аероби;
б) задължи анаероби;
в) по избор аероби;
ж) факултативни анаероби;
5.Sreda Kitty Tarotstsi служи да подчертае:
а) задължи аероби;
б) задължи анаероби;
в) по избор аероби;
ж) факултативни анаероби;
Лабораторни упражнения №7.
Относно: физиология на микроби. Принципи на отглеждане и идентификация на микроорганизми.
Проучване цел: Да се научим бактериологичното метод за диагностика на инфекциозни заболявания.
Студентът трябва да знаете:
1. Етапи бактериологичен метод за диагноза.
2. идентифициране на чиста култура от морфологични, багрилен,
културални и биохимични свойства.
3. хранителна среда за изследване на ензимната активност.
4. бактериофагите и тяхното прилагане.
5. Класификация на ензими.
Студентът трябва да бъде в състояние да:
1. Уверете се, насадени от материал в околната среда Хис и BCH.
2. Определяне антибиотична чувствителност чрез стандартни дискове.
3. Проверка на чистотата на изолирания култура.
Ензимите, класификация. Ензими, които разцепват въглехидрати, протеини,
мазнини, ензими патогенност. Захранващи среди, използвани за
изследване на ензимната активност на микроорганизмите.
Проверка на макро чистота изолирана култура и микроскопски.
Идентификация на чисти култури от бактерии на морфологични,
багрилен, културни, биохимични, fagolizabelnym
свойства (етап 3).
Бактериофагите, използването им за идентифициране на бактерии.
Определяне на антибиотична чувствителност чрез стандартни дискове.
Получаване на намазка, оцветяване по Грам.
Засяване културална среда Хис и ВСН.
Демонстрация на среди за изучаването на ензимната
Демонстрация бактериофаг феномен на твърди и течни
Демонстрация изолиране на чиста култура на мобилен
метод микроорганизми Shukevich.
Информация, свързана с Матера
Проучвания фаза III. След 24 часа, наклон ИПП открива хомогенна растеж на плака жълтеникаво твърдо вещество. За да се провери чистотата на флаконите изолационните култура се получава намазка, Грам оцветени и mikroskopiruyut. За да се направи оценка на чистотата на културата трябва да видите най-малко 10 зрително поле. Като в намазки с grozdevidno микрофаска IPA намира само грам-положителни коки, показва чистота на изолираните култури.
За определяне на биохимични инокулираните бактерии, изолирани брой културална среда цвят (глюкоза, лактоза, манитол, захароза, малтоза, и ВСН за определяне на водороден сулфид и индола) или определи тези свойства използват дискове система индикаторна хартия (Nordic).
Културите се поставят в инкубатор при 37 ° С в продължение на 24 часа.
Ензимите са силно специфични биологични катализатори, които са необходими за живота и размножаването. Голям брой реакции, проявяващи се в живите бактериална клетка, показва наличието на значително количество от бактериални ензими. Ензимите - вещество на протеин характер с високо молекулно тегло. Някои от тях принадлежат на протеините, а други са сложни протеини. Те са изработени от две части на частта на протеина и не-протеин, наречен протезна група. В състава могат да включват витамини. нуклеотиди атоми на желязо и така нататък. Връзката между протеин част на ензим от простетични групи и могат да бъдат твърди и крехки. Ако има нестабилна поради дисоциация ензимен разтвор се случва и по този начин може да бъде освободен безплатно протеза група.
Irosteticheskie лесно дисоциира група от ензими, наречени коензими. Обикновено, ензими са разделени на следните групи:
1. Оксидоредуктази. всички ензими, които катализират редукционни реакции на окисление.
2. трансферази. катализират трансфера на различни групи (например амино групи, фосфатни остатъци, и така нататък. г.
3. хидролази, разкъсвайки чрез хидролиза или други съединения Тт; този клас също включва фосфатаза и dezampnazy - ензими, разделени на разстояние съответно от хидролитични фосфати или амониеви групи от различни органични съединения.
4. лиази, ензими, субстрати отцепени от nonhydrolytic от определена група (например, на СО, НО, SH3 и т. Д).
5. изомерази катализират вътрешномолекулни пренареждания в субстрата.
6. лигази (синтетази) - клас ензими, които катализират свързването заедно на две молекули с едновременно разкъсване pprofosfatnoy комуникационни трифосфати (например, образуване на C - G, С - Н или С - S връзка).
Най-висока ензимна активност имат сапрофити; в по-малка степен това свойство се изразява в патогенни бактерии. Изследване на ензими патогенни бактерии е изключително важно, тъй като въз основа на определяне на ензимната активност на микробите могат да се разграничат различни видове и да се определи естеството на патоген заболявания. Освен това, ензимната активност на микробен патогенеза и определя клиничната картина на инфекциозно заболяване.
Ензимите са диференцирани в екзо и endofermenty. Exoenzymes разпределени клетка в външната среда, разделяне процеси, изпълнявани Макромолекулярна органични съединения за опростена разположение за усвояване.
Ензимите Бактериите са разделени на конститутивен и предизвикана. Първата група включва тези ензими, които са синтезирани от бактериална клетка, независимо от това дали, в каква среда се отглеждат бактериите. Индуцируемите ензими, произведени от дадена бактерия само в отговор на специфичен индуктор присъства в средата.
Тестови задачи ЗА ПРОВЕРКА НА ЗНАНИЕТО
Посочете всички правилните отговори:
1. saccharolytic свойства микроби проучване на медийния:
г) кръвен агар;
г) в API на тестова система;
д) тест Lachema система.
2. биохимична активност на бактерии върху твърда среда Хис се отчита:
а) Промяната в цвета на средата;
б) образуване на утайка;
в) образуване на газ;
г) разделяне среда.