Express - методи за оцветяване цитологични препарати

Начало | За нас | обратна връзка

Петна по Алексеев. Отговорът е даден в рамките на 5 до 10 минути. метод Алексеева осигурява бързото обработване цитологични препарати azureozinovymi смеси принцип Romanowsky на за получаване цитологичния kartiny.Metodika препарати обикновено готвене.

Лечение на наркотици може да се направи по два начина:

1. Предметните стъкла с сушат на въздуха препарати в количество от 3 - 5shtuk, поставени на рафт за цветни отпечатъци или нагоре инсулти. Очно пипетира върху всяка формулировка се прилага Romanowsky-Giemsa багрило разтвор в количество от 5 - 8kapel. Боята трябва да покрива цялата намазка или шрифт. В това състояние, лекарството се оставя в продължение на 60 секунди, през които се фиксират с метанол в състава на мастилото, и частично оцветени нейните елементи. След това мастилото върху стъклени слайдове, 10 - 16 капки неутрален дестилирана вода се загрява до 50 - 60 ° и се смесва боя разклащане с вода. Препаратът се оставя за L- 2minuty. След струя неутрален дестилирана вода от промивна колба, без източване, промива се с препарат боя. Остатъкът се излива вода и хартия лекарство prosushivayutfiltrovalnoy. гледане Боядисани наркотици под микроскоп, първо с малко увеличение, а при съмнителни места се движат с цел потапяне. Останалата част от щрихите оставени наводнен боя 3 - 5 минути, в случай, че първото лекарство ще бъде блед цвят. Първият обикновено се рисува с най-финото на препарати, тъй като тя бързо не се напои и се изсушава.

Покритие от този метод, тъкан и туморни клетки и левкоцити почти не се различава от тях в оцветяване състави обработени чрез конвенционални цитологични методи. В тази структура ясно разграничени ядра са ясно видими нуклеоли, зърнистост и включване протоплазма. Частично хемолизи еритроцитите, което го прави по-лесно да учат.

2. Приготвя се разтвор от 0,4% сухо боя Leishman в метанол (метилов алкохол). За да се ускори разпадането на боя може да бъде поставен в затворен флакон във водна баня при 60 ° в продължение на един час при разбъркване. При охлаждане на боята трябва да се филтрира. Разтвор на стелажи. Препаратите се поставят върху рафт за боядисване е покрита със слой от боя netolstym разтвор Leishman (12 - 15 капки на лекарство) и да ги остави за 20 - 30 секунди. След това, без източване мастило от Leishman разтвор стъкло се прибавя боя Романовски-Gimzyna неутрален дестилирана вода (1.6 капки на 1 мл вода), нагрява се до 50-60 °, в такива количества, които държат стъклото. Първият състав се изплаква след 2 - 3 минути, а останалите - dokrashivayut. Лекарството се суши с филтърна хартия и се изследват под микроскоп. Натривки с този метод на цвят по-живи, отколкото в първата. Червените кръвни клетки се запазват. Особено ясно се появяват тъмни нуклеоли върху леко оцветени ядра. Дестилирана вода за разреждане на боята и изплакване с препарати трябва да има рН от 6.8 - 7.0.

Цвят цитонамазка. метод оцветяване Papanicolaou yavlyaetsyanailuchshim за гинекологични намазки, тъй като този метод полихроматична, позволява да се оцени степента на узряването на цитоплазма (синьо-зелено в незрели клетки за розов в клетки от зрели цитоплазма и оранжево в клетки с корнификация) чрез мокро фиксиране добре запазени ядро, клетъчна мембрана и хроматинова структура. Отговорът се дава след 15 до 20 минути.

1. Смес Никифоров.

2. Алкохол 95, 90, 80, 70 и 50 °.

3. хематоксилин Harris.

4. 0.25% разтвор на солна киселина.

5. Paint Orange Г.

7. Абсолютен алкохол.

9. канадски балсам.

Получаване Harris хематоксилин:

1 грам хематоксилин разтваря в 10 мл абсолютен етанол, 20 г калиев kvatsov разтваря чрез загряване в 200 мл дестилирана вода. След 24 часа двата разтвора се комбинират и добавят към 0,5 г червено или жълто живачен оксид. Разтворът се нагрява до кипене, охлажда се и се филтрува, след 24 часа.

Получаване на разтвора на багрило Orange G:

Към 100 мл 0,5% алкохолен разтвор на оранжево багрило F се прибавят 0,015 грама на фосфоволфрамова киселина.

Получаване на композитен боя (ЕА-36):

45 мл от 0.5% алкохолен разтвор на светло зелено с 10 мл 0.5% алкохолен разтвор на bismarkbraun, 45 мл 0,5% разтвор на алкохол еозин жълтеникаво (вода и алкохол разтворим), 0.2 г фосфоволфрамова киселина , капка от наситен воден разтвор на литиев карбонат.

Намазки след фиксиране се извършва последователно съдове, съдържащи 80, 70 и 50 ° алкохоли и дестилирана вода. След 6 минути Harris хематоксилин, промива внимателно с дестилирана вода и се потапя (6 пъти) 0.25% разтвор на солна киселина. След това, на 6 минути се поставят в съд, съдържащ течаща вода и се промива с дестилирана вода. След това се извършва след 50, 70, 80 и 95 ° алкохоли. Дехидратирани така препарати, оцветени за 1.5 минути Orange G багрило, промива се в две промени на 95 ° алкохол и цвят в продължение на 1.5 минути композитен боя (ЕА-36). Намазки се промиват с излишък боя в три промени на 95 ° алкохол. Други препарати осветяване провеждат чрез абсолютен алкохол чрез смес от абсолютен етанол и ксилен в равни обеми и накрая през ксилен и след това поставени в Канада балсам.

За техники многоцветен боядисване като метод, посочен Schorr (или modifikatsiyuM. Arsenyev (1963), и др.), Което позволява на клетките да се диференцират еозинофилен (червено) и базофилна (синьо) и методи монохромни (Н & Е оцветяване или хематоксилин и фуксин) получаване .Fiksatsiya се провежда в метилов алкохол (15 минути). Багрене заготовки, произведени с хематоксилин-еозин. Фиксирани намазки оцветяват с хематоксилин воден да се получи бледо виолетово оцветяване (7 - 10 минути). След промиване с вода отново намазки се оцветяват с 1% воден еозин А за 0.5 минути, промива се с вода и vysushivalis.Pri полихроматична метод повърхностни клетки се оцветяват в червено или синьо-зелен цвят, междинно и парабазален - синьо-зелен, базалната - в тъмно синьо.

Цитохимични методи се основават на специфични химични цвят реакцията между химически реагент и специфичен клетъчен компонент за определяне на клетки от различни вещества (по специално избрани реагенти настъпва оцветяване на определени вещества в цитоплазмата и на степента и естеството на цвят се оценява по броя или активността на изпитваните вещества) ,

Когато цитохимични изследване все използване на полу-количествена оценка на резултатите, използвайки принципа Асталди въз основа на идентифициране на различна степен на интензивност специфичен цвят (средно цитохимични фактор - ОЦК).

Schick реакция или PAS-реакция (за откриване на гликоген).

Реагент - перйодна киселина-Шиф (подчертани писмо съкращението и представляват Schick - перйодна киселина-Шиф). Под влияние на гликоген калиев перйодат окислен за образуване на алдехидните съединения лесно реагира с реагент на Шиф (-fuchsin серниста киселина). В местата на локализация разкри гликоген черешово виолетово оцветяване интензивност от които може да се съди за размера на гликоген в клетките.

Освен гликоген, положителна реакция може да даде такива PAS-позитивни вещества като неутрални и кисели мукополизахариди, мукопротеини, гликопротеини и други. Гликоген лесно различава от други вещества с слюнка проба или диастаза.

В периферни кръвни намазки гликоген, съдържаща се в цитоплазмата на неутрофили (като изобилие фин пясък), лимфоцити цитоплазма (като малък брой големи зърна) и тромбоцити (като един голям зърно). В костния мозък точковидна гликоген открива в неутрофили различна степен на зрялост, лимфоцити и мегакариоцити.

Откриване на гликоген от Mc Манус.

метод McManus идентифицира въглехидрати вещество (гликозаминогликани, гликопротеини, гликоген и др.) В цитологични препарати. Методът се основава на образуването на диалдехиди, които се определят като се използва реагент Шиф под въздействието на окислителя (йодна киселина). Клетките гликоген открити като череша червени гранули.

Методи за откриване на ензими:

1. оксидаза - ензими, катализиращи окислителни процеси с молекулен кислород. Сред тях, от особено значение е миелопероксидазната (MP).

Миелопероксидаза -Е лизозомния ензим катализира в присъствието на водороден пероксид окисление на различни субстрати. Той е локализиран предимно в специфичните азурофилните гранули в цитоплазмата и е маркер за гранулоцити миелоидна серия от клетки. Миелопероксидаза е открит в клетки от серията гранулоцитна, тъй myeloblast. Ензимната активност увеличава в клетките узряват. Въпреки това, тъй като тяхната диференциация в зрели клетки, ензимната активност намалява. клетки на миелопероксидаза участват в разрушаването на токсични реакции на водороден пероксид. На цитохимични реакции ензимната активност се определя от окисляването на хромоген (бензидин, о-дианизидин, и т.н.) по метода на Graham-Knoll или негови модификации. Реакцията се използва главно за диагностика на остра левкемия.

2. фосфатаза са част от хидролази. Тези ензими са широко разпространени в човешки клетки и животни. Те участват в метаболитните процеси с мазнини, полизахариди и нуклеопротеини. Те включват такива ензими като кисела фосфатаза и алкална фосфатаза.

Киселина фосфатаза (ЕО) - катализира освобождаването на фосфат от алкохолни или фенолни моноестери при кисело рН. Киселина фосфатаза локализиран в лизозомите и cytochemically идентифицирани поради образуването на оцветени зони червени в областта на субстратната хидролиза. Субстратът може да се използва нафтол-AS-фосфат, а-нафтил фосфат натрий, нафтол-А8-О-фосфат и др. Киселинният фосфатаза присъства в повечето кръвни клетки и костен мозък. На гранулоцити, моноцити, еозинофили и базофили се открива, като се започва от незрели клетки на тези редове, където неговата активност е най-висока.

Алкална фосфатаза (ALP) е ензим kotoryysposoben освободи фосфат, катализира разцепването на фосфатни групи от fosfomonoefirov в алкална среда и участва в метаболизма на липиди и нуклеинови киселини. Той се съдържа само в зрели неутрофили. В кръвта активността на алкалната фосфатаза периферна са значително по-висока, отколкото в костно-мозъчни клетки. Ензимът се определя като жълто-кафяви гранули в цитоплазмата.

3.Nespetsificheskieesterazy (NE), също принадлежат към хидролази. Тези ензими са способни на хидролизиране N-етери на свободни мастни алкохоли киселина. Това е много хетерогенна група от ензими, които се дължат на субстрата имена, които хидролизират. Получава още изоензими 9 NE. Фракциите, 1, 2, 7, 8, 9 са идентифицирани с помощта нафтол-AB-О-хлороацетат и представляват hloratsetatesterazy активност, която присъства в гранулоцити. Фракциите, 3, 4, 5, 6 взаимодействат с естери # 945; -naftilatsetata и означават отрицателни емоции, предизвикани в моноцити, плазмени клетки и тромбоцити. Най-голям интерес за хематолози са hloratsetatesteraza, # 945; -naftilatsetatesteraza, кисел # 945; -naftilatsetatesteraza. Nespetsificheskieesterazy са лизозомни ензими.

# 945; -Naftilatsetatesteraza (# 945; NAE) намерени във всички миелоидни клетки, но неговата активност е най-високо в моноцити определени. В Еритроидните клетки обикновено това не е дефинирано.

Kislayanaftilatsetatesteraza- е ензим, локализиран в гранули лизозомни. Неговата активност е открита в реакция с # 945; -naftilatsetatom в кисела среда при рН 5,8. Характерно за Т-хелперните клетки. Освен това, се открива в клетки от моноцитен серия.

Hloratsetatesterazu (НАЕ) и се нарича на гранулоцити. Както миелопероксидаза, е маркер на неутрофилите. Ензимната активност се открива като син цвят гранули.

Dual отговор на НАЕ и # 945; NAE се извършва в последователност на намазка. Това позволява на клетките да се делят гранулоцитни и моноцитни линии, които има стойност при диагностицирането на миеломоноцитна левкемия.

Brachet реакция. Методът, използван за идентифициране на РНК. Използване на реагент смес от двете багрила: метил зелено и pironina.Pironin специфично оцветява РНК в червено за получаване tsvet.Poetomu нуклеолата на (състоящи се от ядрото) и части от цитоплазмата се ribosombogatye червено tsvet.Drugie основна структура (в допълнение към нуклеолата) - зелен.

Feulgen реакция. Основният реагент - киселина фуксин (реагент на Шиф) Структурите на ДНК-съдържащи се оцветяват лилаво-червено.

Цитохимични проучване lipidov.Lipidy локализиран в цитоплазмата на клетки главно в мембрани на органели и се намират главно в неутрофилни гранулоцити. Те играят важна роля в пропускливостта на мембраната. Цитохимични проучване липид основава на използването на багрила, които се разтварят в липиди (Судан III, IV Судан, chernyysudan и др.). За да се идентифицират неутрална мазнина са Судан III, оцветяване на мазнини оранжево. Липиди, идентифицирани по-добре с Sudan Black (черен оцветяване).

1. багрила. Класификация на бои.

2. багрилни свойства на клетъчните структури. Метахроматна.

3. Група или големи ядрени бои, терминът "базофилия".

4. Кисели багрила - цитоплазмени, понятието "acidophilia".

5. Neutral багрила. Безразлични багрила.

6. Получаване на багрилата.

оценка 7. Качество на цитологичен препарат. Артефакти.

8. стандарт светлинна микроскопия на фиксирани, оцветени петна на. Разделителната способност на светлинен микроскоп.

9. Общи методи за оцветяване цитологични препарати.

10. оцветяват с хематоксилин-еозин петна. Видове хематоксилин багрило.

11. Покритие-лазур еозин багрила.

12. Техниката за боядисване на Романовски-Гимза.

13. Метод съгласно Pappenheim.

14. Покритие съгласно Leishman.

15. Express - методи за оцветяване цитологични препарати: Алексеева оцветяване.

16. Полихром okraskapo намазка.

17. Метод poShorru Полихроматичен оцветяване.

18. цитохимикали методи на изследване, целта, целта, материали ..

20. Методи за откриване на ензими, за да се оцени тяхната активност.

21. Методи за откриване на ДНК Feulgen.

22. Метод за откриване на РНК Brachet.

23. Метод за откриване на гликоген Mc Manus.

24. Метод за откриване на липиди.