Дифтерия - микробиология с техниката на микробиологични изследвания
Страница 52 от 91
Първо дифтерия бацил Corynebacterium diphtheriae) е описана от Е. Klebs през 1883 и Е. Leffler - 1884
Морфология и багрилни свойства. Бактериите се различават изразен полиморфизъм. Обикновено те имат дължина от 3-4 микрона и 0,3-0,5 микрона дебелина (фиг. 83 и 84).
Фиг. 84. НатриВка на дифтерия филм. Покритие на метиленово синьо (процес един етап).
Фиг. 83. дифтериен прът култура боядисване на от Neisseria.
Има, обаче, някои са по-дълго, някои по-кратки форми. Морфологично срещу дифтерит пръчки характеризиращ се с това, че те съдържат гранулирани цитоплазмени включвания, и при един или двата края на клетките са колба с форма на удебелявания, което им дава форма боздуган (sogupa - боздуган). Оттам идва и името на Corynebacterium diphtheriae. Flo един спрямо друг пръчки са поставени под прав или малък ъгъл, често като разперени пръсти.
Дифтерия бацил Грам-положителни и добре боядисани всички анилинови бои, но възприема цвят неравномерно това. Това зависи от зърно, съдържаща се в него volutin (Бебе-Ernst). Последните имат кръгла или овална форма и обикновено са разположени в краищата на пръчки. Volyutinovye зърно възприемат цвят много по-интензивно на останалата част от цитоплазмата, което ги прави лесни за намиране и използване на прости техники за оцветяване. В лабораторна практика за тази цел са метиленово синьо оцветяващи средства, или чрез метода от Neisseria (вж. Оцветяване техника, стр. 51).
Културни и биохимични свойства. растеж Дифтерит бактерии настъпва при аеробни условия при оптимална температура от 37 °.
Фиг. 85. Колонии на дифтерия бацили на telluritovoy
на околната среда.
и - гравис колонии тип; б - тип mitis колонии.
Най-добрата почва за отглеждането на дифтерия бактерии е сгънат кон или говежди серум. На тази среда, колониите дифтерия бацили могат да бъдат открити чрез 8.10.14 часа. Колониите кръгла форма, изпъкнала, малко повишени в центъра, с диаметър 1 мм. Повърхността на колонията е гладка или леко зърнеста, цвят крем. По периферията на колонията са по-прозрачни, отколкото в центъра. Културата расте като не се слеят един с друг колонии, което му придава леко тромав форма (шагрен).
Видове дифтерия бактерии. Въз основа на културни и биохимични свойства на трите вида пръчки дифтерия: гравис, mitis, ШегтесНиз. С вида на свързана патогени разлики в клиничната картина на заболяването. Счита се, че тип дифтерия гравис пръчки се появят по-тежки случаи, токсични. Те образуват по telluritovoy среда (агар с кръв и калиев телурит) относително голям serovatochernye или черни плоски, необработени колонии с радиална ischerchennostyo и назъбен ръб (фиг. 85) за бульон се получава гранулиран утайка и филм се разлага нишесте и гликоген, хемолиза не е причинено , Пръчици тип mitis наблюдава в случаите, когато общите токсични реакции са леки, въпреки че филмите на сливиците може да бъде доста голям. Те образуват в телур-агар гладка изпъкнала малки блестящи колонии
черно с гладка ръб, равномерно разбърква бульон, нишесте и гликоген не се разграждат, gemolitichny. ШегтесНиз тип заема междинно положение между гравис и mitis. Въведете ШегтесНиз бактерии растат слабо и се образува малък плосък черен колония с прозрачен граница на ръба. В сряда Tyndall (цистин-телурит - серум среда) колония дифтерия бацили са заобиколени от хало на тъмно кафяво. В момента, обаче, тя установи, че клиничното протичане на заболяването често зависи от бацил тип дифтерия. Всички видове дифтерия бацил разграждат от глюкоза, малтоза, галактоза, за да образуват киселина, не обгазяване. Лактоза, захароза, манитол, и те не се разлагат.
Дифте-роиди и lozhnodifteriynye бактерии. Озаглавена "дифте-роиди" условно Обединените коли, дифтерия морфологично подобни, но не с токсични свойства. Те се намират върху кожата и лигавиците на здрави хора. Тази група включва Corynebacterium ксероза, Corynebacterium акне и др.
В устата на лигавицата, носа, назофаринкса настъпва lozhnodifteriynaya коли - Corynebacterium Hoffmani.
Специални трудности при разграничаването им от дифтерия бацили опитни техник микробиолог не се усеща. Например, пръчка Hoffmann-кратък и по-дебел, не полиморфизъм разположени по двойки или ограда, не зърно volutin. Corynebacterium ксероза за разлика от дифтерия бацил има няколко зърна volutin. Други дифте-роиди размер по-малък дифтерия бацил, не разполагат с полиморфизма, са подредени една до друга под ъгъл или ограда, не разполага зърна volutin или само по едно зърно в единия полюс на клетката.
В случай на съмнение, че е необходимо да се прибегне до изучаване на биохимичната активност на изолирани култури и токсичност.
Земни среда. 1. телурова на кръвно-агар. Към 100 мл разтопен и се охлажда до 50 ° 2% пептон месо-агар (рН 7,6) се добавя 5-10% дефибринирана човешка или животинска кръв и 1 мл 2% разтвор на калиев телурит (KgTe04). Средата се размесва и се излива в чашата. В тази среда, намалена дифтерия бактерия калиев телурит на метален телур.
По-телурит кръвен агар coccal бактерии група растат бавно. Aureus колонии от края на 2 дни стават големи сив или черен с кафяво оцветяване. Coli колониите Hoffmann от края на първото дни на растеж - гладка, мазен черен с център и сиво на периферията, на втория ден цялата повърхност на колонията става черен.
- Сряда Clauberg. 100 мл 3% хранителен агар (или 7,5 грама сух хранителен агар в 100 мл дестилирана вода) се стопява, се добавят 3 мл от 2% разтвор на калиев телурит 10 мл глицерол и 50 мл смес от лак кръв. Бързо всичко се смесва и се изсипва в чашата. Medium е ясно, цвета на червено вино.
Лак кръв получава както следва: към 34 мл дестилирана вода (стерилна), добавя се 16 мл дефибринирана кръв говежди или сушени кръв или човешка разрежда инструкция съответно.
Получаване на смес от глицерол: за 40 мл говежди дефибринирана кръв или човешка кръв или разредена сух добавят 20 мл стерилен глицерол химически чиста. Сместа се препоръчва да престои в хладилник в продължение на 3-6 седмици. В тази среда, дифтерия бацил, регенериране телур сол расте под формата на кръгли непрозрачни колонии с черен или тъмно сиво център. Lozhnodifteriynye непрозрачни пръчки образуват малки колонии от сив с кафяв център. Дифте-роиди растат под формата на изпъкнали блестящи сиви колонии с черен център.
- Цистин-телурит-серум среда Tyndall (модифициран съгласно инструкциите). Към 100 мл 2% от разтопен и се охлажда до 60 ° хранителен агар се прибавят последователно: 1), 1% разтвор на цистин в 0,1 N разтвор на H2S04 (или НС1) - 12 мл; цистин е необходимо да се разтваря в сярна или солна киселина, загрява на водна баня при температура 80-85 °, 2) 0.1N. NaOH-разтвор 12 мл и 3) разтвор 2% калиев телурит 1.8 мл, 4), 2,5% разтвор на натриев Hyposulfite 1.8 мл, 5) нормален конски или говежди серум - 20 мл. Средата се разбърква и се излива в стерилни петриеви слой 4-5 мл.
- Суха индикатор hinozolnaya сряда извършат B (съгласно инструкциите). Към 100 мл студена вода се прибавят 8.7 грама сух прах hipozolnoy среда, добре смесени и се нагрява на слаб огън до пълното разтопяване на агара. Средата се вари в продължение на 2-3 минути, като не се допуска агар стик, за да се образува krupnopuzyrchatoy бързо уреждане на пяна.
Микробиологична диагноза. В дифтерия, следните видове лабораторни изследвания: bacterioscopic, бактериологични, експериментално. Материалът за изследването са инфектирани секрети на лигавиците, филми, и епидемиолози за търсене - мляко, сладолед, промивки от различни обекти Обърнете стерилен тампон материал, състоящ се от парче памук, навита върху края на дървена пръчка или метален прът (играчки и др.). При наличието на ясно очертани дифтериен филми трябва да търка засегнатата област с тампон, напоен да получите определено количество ексудат. Материал, взет от носа в една и съща тампона, но някои минимален брой рана вълна върху него. С цел да се улови на материала, е необходимо да се премине първото тампона носоглътката. При вземането на материала от
Noca необходимо да се направи в тоалетната ноздрите (измиване с физиологичен разтвор или алкохол) и не се допира до кожата на носа.
Взети материал се поставя в епруветки и веднага изпратени в лабораторията. Ако доставката отнема повече от 3-4 часа, като се използват тампони навлажняват с разтвор на 5% глицерол в 0,85% физиологичен разтвор. Тампоните трябва да бъдат защитени от слънцето действие, замразяването и изсушаването. Предимно ваксинация (20-50%), дифтерия бацили от пациентите дифтерия се причинява най-често, като грешен материал и продължителността на времето от момента на вземането му до сеитба.
В лабораторията се пристъпи към бактериологично изследване. Тампоните се въвеждат в тръбата от сгънати конски серум и след триене на повърхността на съдържанието в серума, докато получаване въртеливо движение. В същото време направи културата на чаша telluritovym кръвен агар, в сряда или сряда Clauberg Tinsdalya да получат чисти култури от дифтерия бацили. За диагностични цели, съдържанието на пряк микроскопичен проучване на тампона в момента се провеждат рядко, но понякога при спешни случаи, по искане на лекар, прилагащи това е оправдано. Тогава, след посадъчен материал направи петна за оцветяване в синьо и Neisseria.
Поставеният материал отглеждат при 37 ° и се изследва 18-24 часа по-късно. Може да се използва за извършване на проучване, например 6-12 часа в спешни случаи. От възрастен култура получава намазки и се оцветяват с Грам, алкална метиленово синьо и Neisser и mikroskopiruyut. Понякога това забави растежа на микроби. В тези случаи е необходимо да се оставят културата за още един ден и да го повтарям микроскопско изследване. Наличието на микроорганизми с дифтериен характеристика морфологичен и багрилни свойства, може да се счита за положителен резултат.
Един метод, който позволява да изберете дифтерия бацил бързо е, че тампона premoistened стерилен серум, който се търкаля върху тампона чрез нагряване до 80 °. Серум тампон изтри засегнатата област (фаринкс, сливиците) и се поставя в термостат при 37 °.
Имоти дифтерия бацили и в близост до него дифте-роиди