Микробиологична диагноза
Начало | За нас | обратна връзка
Дифтерия бацил - причинители на дифтерия.
Diphtheria - остро инфекциозно заболяване, характеризиращо се с токсично поражение на сърдечно-съдовата и нервна система, както и специфичната фибринозен (дифтериен), възпаление на мястото на входната врата.
Причинителят е била открита през 1883 г., Klebs, през 1884 г. Ф. Льофлер го открои като чиста култура. В 1 888 грама. Ру и Yersin получи дифтериен токсин, и през 1895 г. Behring и Ру независимо получи дифтерия серум. През 1923 г. Рамон разработила технология за производство на дифтериен токсоид, а по-късно получава дифтерия серума. NG Gabrichevsky прилага дифтерия серум за терапевтични цели и организирана производството си в България.
Вижте - С. diphtheriae
Corynebacterium Родът включва около 60 вида. Според Международната класификация на Burgi този род е разделена на 3 секции:
1) патогенен за хора и животни;
2) патогенни за растенията;
Права или леко извити пръчки от 0.3 - 0.6 х 4 - 8 микрона, не образува спори имат Микрокапсула все още.
Характеристики на дифтерия бацил е присъствие наподобяват клавикули Засегнатата в краищата; пръчки различават като полиморфизъм; характеризиращ взаимното разположение на бактерии в намазки - под формата на номера V, X, L (не цялата промяна в делене);
Те са разположени в "щифт светлина" В дебели намазки. Наподобяват клавикули сгъстяване в краищата, свързани с присъствието на зърна volutin (прасеца Бебе-Ernst) - производни на нуклеинови киселини, metahromatinovye гранули полиметафосфат. Бактериите могат да образуват филтриращи и L-форми.
Грам-положителни микроорганизми. Когато се оцветяват по метода на тялото Neisseria клетка е оцветен в синьо, и зърно volutin - жълт. метод Leffler оцветява цитоплазмата в син цвят, а зърното volutin - в тъмно синьо.
Diphtheria - факултативни анаероби otimalnaya тяхната температура култивиране 37 ° С, рН 7.3-8.0. Изискване на хранителната среда, необходими за растежа на присъствието на цистеин, хистидин, фенилаланин, метионин, и т.н. Растежни фактори са Ca 2+. Mg2 +. Fe 2+. Zn2 +. Mn 2+. Cu 2+. За култивиране използва серум (Loeffler среда), допълнена с кръв hinozalnuyu Buchina среда. Диференциална диагностични средства: telluritovaya среда (Конради, Troch, 1913) Glitserinovokrovyanaya среда с телурит (Clauberg сряда # 921; # 921), суроватка telluritovy агар с цистин (Tyndall), телур-шоколад агар McLeod.
В сряда Leffler бактерии се развиват под формата на сиво-крем колонии от "шагрен" на типа.
В среда telluritovyh възбудител форми сиво черно колония намаляване поради телурит на метален телур с черен цвят и се натрупват бактерии.
Дифтерия бацил неактивен, ферментира да образуват киселини глюкоза, малтоза, галактоза, декстрин, захароза не се разлага, лактоза, манитол, намаляване на нитрати в нитрити. Урея не хидролизира (ЗАКС отрицателна проба) не образуват индол. Разпадане цистеин (Pisa положителна проба).
Според културата, биохимични, патогенетична и някои други свойства на бацили на дифтерия са разделени на 3 биовар.
1) биовар Mitis, характеризиращ се със следните свойства:
- ферментира глюкоза, нишесте. малтоза не ферментира захароза, гликоген, декстрин;
- tsistinaznoy притежава активност;
- възстановява нитрати;
- уреаза проба е отрицателен;
- на носители с телурит форми фини гладки блестящи черни колонии с гладък край;
- за да се получи еднородна течна среда мътност и прахообразна утайка;
- Тя дава хемолиза на медийната област кръв;
- ниска токсичност;
- патогени предизвика леко спорадична честота.
2) биовар гравис, характеризира със следните свойства:
- ферментира глюкоза, нишесте, декстрин, малтоза,
- tsistinaznoy притежава активност;
- възстановява нитрати;
- уреаза проба е отрицателен;
- на носители с телурит форми голям, суха, тъпа, плоски, сиво-черни колонии, поставени в центъра, с радиални бразди и неравномерно ръб (подобни на стайни);
- в течна среда образува филм мътност kroshkovidny или груби утайка;
- Тя дава хемолиза на кръв медии;
· Има силен генотоксични свойства;
· Разграничава от пациенти с тежко дифтерия, причинява флаш група.
3) биовар ШегтесНиз, характеризиращ се със следните свойства:
· На среда с телурит форми фин сух матово сиво-черен колонии с прозрачен периферия и неравномерно ръб;
· На течната среда, последвано от мътност дава покритие и генериране на фина утайка;
· Хемолиза на кръв носители отсъства.
Дифтерия бацил има две антиген
1. - антиген (група), клетъчна стена полизахарид, термично стабилна, даде кръстосани реакции с микобактерии и nokardiyami;
2. - антиген (проба), капсула, термолабилен, имуногенни, специфични за видовете.
На практика, серотипа не е необходимо, обаче, произведени серум диагностика на РА, РНА.
За идентификация се използва фаг типизиране (22 фаг) и bakteriotsinotipirovanie (25 бактериоцини).
Токсини. Придържайте се отделят и токсин - дифтерия екзотоксин. По силата я нарежда на трето място след ботулинов и тетанус. Термолабилен, силно токсични, имуногенен, защитно, има обезболяващо действие. Gistotoksin има dermonecrotic, хемолитични свойства. Той се синтезира като неактивен прекурсор - единична полипептидна верига с молекулно тегло 61 кД. Активният под действието на протеаза, която отрязва полипептид две свързани помежду си чрез дисулфидни връзки на пептида: А (21 Ша) и В (39 Ша). пептид акцептор изпълнява функция - признава рецептора се свързва с него, образувайки междумембранно канал, през който влиза в клетка пептид А. пептид - ензим, който позволява прехвърлянето на аденозин дифосфат рибоза от NAD една от аминокиселинните остатъци (хистидин) протеин удължаващ фактор EF- 2. В резултат на изменение на EF-2 губи своята дейност, което води до инхибиране на синтеза на протеини в етапа на рибозом транслокация. Токсинът се синтезира само С. diphtheriae, лизогенен умерено на превръщане на Tox-профага се интегрира чрез сайт-специфична рекомбинация. В оперон, кодиращ синтеза на токсин има промотор и Tox R 3 секции: Tox S, A Tox, Tox Б. Tox S - осигурява изход токсин през мембраната в периплазменото пространство на бактериалната клетка. Загуба на клетка профаги или мутации в токс-оперон прави клетките са малко токсични.
Ензимите, патогенност. хиалуронидаза, невраминидаза, fibrinolysin, каталаза - инвазия фактори Leukocidin - осигурява устойчивост на фагоцитоза;
Структурните и химични компоненти на клетката - питейна (за насърчаване на адхезия на клетки, чувствителни) микрокапсули (придава устойчивост на фагоцитоза), кабел-фактор (трехалоза difosfoefir-6-6 и korinemikolovaya korinemikolinovaya киселина като дава фосфорилиране в митохондрии) бактериоцини (koritsiny) кодираща плазмиди, чиито синтез се предава.
Когато се загрява до 60 ° С коли умират в продължение на 10 минути при 100 ° С е незабавна смърт. 5% разтвор на карболовата киселина осигурява инактивиране чрез - 1 мин. Под влияние на пряка слънчева светлина бацил оцелява в продължение на няколко часа, сух филм и зеле - 3-4 месеца. на битови предмети и дрехи се съхранява до 15 дни, меки играчки - на 3 месеца. във вода и мляко - до 20 дни в праха - до 5 месеца. Дифтерит бацили са чувствителни към пеницилин, тетрациклин, еритромицин.
Източникът на инфекцията - болен човек, превозно средство или оздравяват.
предавателни механизми:
- aerogenic (път - във въздуха и във въздуха прах);
- ПИН (път - индиректен контакт).
Пациентът е опасно (в смисъл на предизвикателство) с последните дни на инкубационния период.
Секция порта - лигавиците на носа, фаринкса, ларинкса, трахеята, бронхите, конюнктивата, външните полови органи; рана повърхност, пъпната рана.
Инкубационният период - 2-14-20 дни.
агенти причинители са адсорбирани върху чувствителните клетки колонизират епител. Секретират gistotoksin че инициира развитието на местното фибринозен възпаление, некроза, епителен paretic вазодилатация с нарушена пропускливост, тъкан оток и изход фибриноген от кръвоносни съдове. Фибриногенът се влияе от тъкан тромбопластин, некротична тъкан и коагулира атмосферен кислород. Фибринозен филм, образуван по повърхността. На стратифицирана плоскоклетъчен епител - дебелина, заварени към съседните тъкани; на еднослоен - тънък, лесно да се прибира. Растежът на филмите в дихателните пътища може да доведе до задушаване (вярно круп). Процес придружава регионален лимфаденит. Системни ефекти на токсина води до хемодинамични компромис. Разработва токсичен миокардит и началото на парализа на сърцето. Съществува риск от бъбречна тръбна система, некроза на коровата слой. В нервна система - цитолиза на нервните клетки с развитието на напредналите парализа на мекото небце, диафрагма, сърце, блуждаещия нерв. Смъртта може да настъпи при дифтерия от ранна или късна парализа на сърцето и диафрагмата, и в резултат на истинските песъчинки (обструктивни дихателни сълзотворен филми).
При бебета е по-вероятно да развият гърлото дифтерия (nasmokr, слаба експресия на общите прояви). Необходимо е да се разгледа на пъпната рана с цел избягване на местен процес.
След заболяването се развива, за токсичност резистентни щамове и малко изразена антимикробна имунитета. Може развитието на състоянието на носител (10%) и повторно заразяване (6-8%). ниво имунитет може да се зададе в ЗНЗ. Диагностични - кредити - 1: 200 и по-високи. Със същата цел реакционната Шик - интрадермални microdoses дифтериен токсин (1/40 DLM 0,2 мл) интрадермално. След 48 часа, има зачервяване и инфилтрация, което предполага не антитоксични антитела; ако реакция настъпва. Поради риск от изостряне на чувствителността на организма, пробата се извършва рядко.
Тест материал - слуз от гърлото, носа и сливиците филм, зарастване на заустване, Кръв
1. Метод Bacterioscopic - намазка микроскопия на изпитвания материал (оцветяване по Грам, Neisseria, Leffler).
2. бактериологични метод - избор на чиста култура на патогена и идентификация. Не само трябва да бъде изолиран от дифтерия бацил тестов материал, но също така да се определи неговата генотоксичност.
Определяне генотоксичност S. dphtheriae:
а) биологичната проба на животни - интрадермално инфекция на морски свинчета културален филтрат дифтерия бактерии - причинява некроза на мястото на инжектиране. Минималната летална доза (20-30 нг) убива морско свинче в ден 4-5;
б) инфектиране на пилешки ембрион (наблюдавани смъртни случаи от действието на токсина);
в) въвеждане на клетъчната култура (откриване СРЕ);
ж) ELISA техника с пероксидаза белязано антитяло;
г) използването на ДНК сонда за откриване Tox-оперон в генома;
д) Ilek и Ouchterlony тест (1948) - на базата на способността на токсин и антитоксин дифундират в Утайките агар и Форма (мустаци, стрелки) в процеса на дифузия - метод двойно утаяване в гел временен отговор може да бъде издаден след 48 часа при 72 ч - извода за наличието на токсикогенни коринебактерии, след 96 часа - окончателен отговор.
3. Serodiagnosis - TPHA, ELISA, RIA, ко-аглутинация реакцията, реакционната Schick.
4. Express - диагностика - IFA, ELISA, TPHA реакция на аглутинация.
5. биохимични и молекулно-биологични метод - PCR (откриване на Tox-ген).