Хранителен микробиологична среда

Необходимостта от микробно култивиране свързана не само за изолиране на патогена от изпитвания материал и определяне на неговия вид, но също така и за натрупването на микробна маса в производството на биологични: ваксини, антигени и алергени. За култивиране на различни микроорганизми изкуствени хранителни среди, използвани в лабораторията.

Хранителни среди са: последователност - течност, твърдо вещество, полутвърдо вещество; произход - животински, растителни и синтетични среда на постоянен състав; нарочно - конвенционален или обикновено мнозинство за отглеждане на микроорганизми; Специално - за отглеждане на микроби, не растат или бавно растящи върху конвенционалните медии култура; диференциална диагноза - се използва за определяне на общи или специфични характеристики изследвани бактериални култури (хемолитична, saccharolytic, протеолитично, намаляване и други свойства); селективен - един за изолиране на микробни род или вид на материал, съдържащ смес от различни видове микроорганизми, в които някои видове растат добре, докато други не растат; среда за обогатяване (натрупване).

В основата на много хранителни среди е от животински произход месо вода. Тя се приготвя от прясно постно говеждо месо, освободен от костите, фасции, сухожилия. Раздробен месо (малки парчета или смлени) е изпълнен с дестилирана вода в съотношение 1. 2 (за 1 кг месо 2 литра вода). Екстрахира се за 12-24 часа, варени в продължение на 1.5 2 часа, филтрува се, и се прибавя дестилирана вода до първоначалния обем, излива се в бутилки, флакони, затворени с вата-запушалки и се стерилизират чрез автоклавиране.

Чести (обикновен) среда.

Месо-пептон (ВСН) - хранителна среда течност. За подготовката му за 1 литър вода месо прибавя 1% пептон, 0.5% химически чиста сол и се вари. Месо леко кисела вода, алкализира се обаче ВСН - малко количество от 10- 15% rastvoraKON или NaOH, варени в продължение на 2-3 минути, рН се проверява чрез сравнение Mihaelnsa (Фигура 30.) Or elektropotentsiometrom. бульон месо-пептон се филтрира през хартиен филтър, излива се във флакона се автоклавира.

Месо-пептон агар (MPA) - гъста хранителна среда. Чрез ВСН добавя 2% агар (без азотни органично вещество, получен от морски водорасли) и се нагрява до нейната точка на топене, гореща коригираната рН варено 5-10 мин, филтрува се на горещо през памучна марля-филтър, бутилирана в тръби или колби, автоклавирани. След стерилизация горещите агар тръби са посочени косо под ъгъл 5-6 °. Когато се образува втвърдяване скосен плътна повърхност.

Месо-пептон полутвърд агар се приготвя по същия начин, както на ИПП; разликата се крие във факта, че агар-агар се добавя по-малко - 0,15-0,20-0,25%.

Специално култура медии.

Hottinger бульон получава от триптично смилане (смилане) месо отпадъци - фасция, мазнини, сухожилия. 1 кг месо гарнитури излива 2 л кипяща вода, варени в продължение на 5 минути, охлажда се до 45 ° и се прибавя 5.0-10.0 панкреатин, алкализира се до рН 7.8-8.0 с натриев карбонат, разклаща се и долива с хлороформ (10 мл на 1 л), в близост плътно, съхраняван в топло място в продължение на 10 дни, като се разклаща дневно. Получената дайджест се подкислява със солна киселина до рН 5,5. Съхранявайте на тъмно място. За подготовка на хранителната среда да се прибавя 1 литър вода 100-200 мл усвояването, варени в продължение на 1-2 минути, филтрува се, алкализира се и се стерилизира. Hottinger агар се приготвя по същия начин, както конвенционален ИПП.

Захар (глюкоза) бульон (или агар), произведен като обикновена среда, но се добавя 1-2% глюкоза и се стерилизира чрез преминаващ пара или автоклавира при 0.5 атм.

Месо-пептон желатин. Чрез ВСН прибавя 10-20% желатин (продукт, получен от животински тъкани kleydayuschih), се топи и гореща създаване на подходяща реакционна среда, се пропуска през памучна марля-филтър, дозира във флакони и се стерилизира с течаща пара фракционна.

Месо и черен дроб пептон бульон Кит - Tarotstsi - течна среда за отглеждане на анаероби. Говежди черен дроб се нарязва на малки парченца, се напълва с вода 1: 1, се вари, филтрува се и се добавя чернодробно вода ВСН 2. 1 (2 л 1 л ВСН чернодробна бульон), кипене, се регулира до рН, дозира в епруветки висока колона, в която варени филийки са изложени на черния дроб. Средата се излива върху тръбите 1-2 мл на вазелин масло и се стерилизира в автоклав при 0.5 атмосфери в продължение на 30 минути. ^

Суроватка и суроватка бульон месо-пептон агар се получава чрез асептично добавяне на разтопени или негови N охлажда до 45-50 ° IPA 5-10% стерилен конски серум кръв (или овца, заек) серум хранителна среда след това се разпределя в стерилни епруветки (колбите ).

Серум МРА или дозира във флакони (колона). или в петриево блюдо.

Диференциална диагностика среда. Кръв IPA използва за откриване хемолитични свойства на бактерии. Преди в стерилна колба с стъклени перли са обезкървени асептично (от овце, коне или заек), разклаща се за 15-20 минути за отделяне на фибрина от останалата част на кръвта. Фибриновите съсиреци депозирани на перлите, и дефибринирана кръв (5-10%) стерилен прибавя към стопената и ostuzhennoy ИПП, нежни въртене конуси са равномерно смесени и се излива в стерилни петриеви панички.

Хис среда. вода пептон (състояща се от дестилирана вода, 0,5% NaCl и 1% пептон) се добавя 0.5% въглехидрати (захар или поливалентен алкохол) и 0.5% индикатор Andrede. Обикновено получава набор от носители с различни въглехидрати, индивидуално. Индикатор използва 0,5 г киселина фуксин, 16 мл 4% разтвор на натриева основа, 100 мл дестилирана вода. Среда с въглехидрати дозира в тръби "gazovkami" (поплавъци) намалиха в епруветки с главата надолу. Среда се стерилизират с течаща парни фракционни въглехидрати. Хис среда може да бъде течен и poluzhidkie- (без gazovok), съдържащ 0.25% агар. Когато се образува ферментация на въглехидрати _inogo зародиш расте в среда киселина, която се извлича чрез действието на индикатор цвят боя. Сряда става червена. Създадена REC въглехидрат ферментационни газообразни продукти се натрупват в поплаваците.

Сряда Ендо. Стопената IPA (рН 7,4- 7,6) е направен от 0,5-1% лактоза и 0.5% от наситен алкохолен разтвор на основния фуксин, обезцветява чрез прибавяне на капки на 10% натриев сулфат. Средата се нагрява и се излива в петриеви блюда. Бактериите, които ферментират лактоза, растат в тази среда под формата на червени колонии.

Левин сряда. Приготвя се 2% агар бульон Hottinger, рН 7.2-7.4 и се стерилизира в автоклав. Към 100 мл готов разтопен агар се прибавят 2 мл от 0,5% разтвор на метиленово синьо А, 1,5 мл от 2% еозин (алкален бактериологично), 2 г лактоза и 0,2 г двуосновен калиев фосфат (KaNRO4). Разтвори на бои се получават като се използва дестилирана вода и се стерилизират чрез Koch апарат. Метиленово синьо разтвор преди употреба се нагрява предварително във водна баня и се прибавя към агара под формата на топлина. След добавяне на тези компоненти на околната среда се смесва добре и се излива в петриеви панички. лилаво сряда.

Бисмут сулфит агар (Vilson- Блеър сряда). IPA (рН 7.5) с индикатор, съдържащ киселинна бисмутов цитрат, натриев сулфат, Mohr сол (сол на желязо sernoammoniynaya), двуосновен натриев фосфат, глюкоза и блестящ зелен. В момента, бисмут сулфит агар (като Ендо агар, сряда Ploskireva) промишленост произвежда под формата на сух прах. 6 г сух прах се разтваря в 100 мл дестилирана вода се загрява с разбъркване се излива в стерилни епруветки и се оставя в полегато положение. Използва се като средата на химикали, които променят цвета си в резултат на редокси (редуциране) процеси, причинени от бактериални ензими. За тази цел се приготвя мляко с метилен нко си г. Прясно обезмаслено краве мляко се алкализира с натриев бикарбонат до слабо алкална реакция с лакмусова хартия, добавя 1% воден разтвор на метиленово синьо и синьо оцветяване. Стерилизирано с течаща пара незначително.

Ако има предположение, че има малък брой бактерии в материала, се препоръчва да използвате носител за съхранение (обогатяване). С р и U Shustova: да IPA (рН 7.4) се прибавя 10% 50% воден разтвор на хипофосфит и 2% разтвор на Lugol. Прилага се до натрупване паратиф бактерии. Сряда Рапопорт: ВСН прибавя към 1% глюкоза, 10% и 1% жлъчна индикатор Andrede. Стерилизирано с течаща пара.

Синтетични носители се използват за изследване на метаболизма на бактериите и други биологични функции. Те са съставени от химически чисти водоразтворими вещества, строго определени количества :. амониев фосфат, калиев фосфат, натриев хлорид, магнезиев сулфат, глюкоза или друг въглехидрати, никотинамид и т.н. Както се изисква гъста синтетична среда получава чрез прибавяне на агар. Стерилизирано в автоклав. (Синтетичен модел среда Sottona

За култивиране на дрожди и плесени след употреба медии

Синтетична среда ван Iterson. Амониевият нитрат (NaH4NO3) 0,5, калиев дихидрогенфосфат (КН2РО4) 0.5, чешмяна вода 1L. Автоклавира при 1 атмосфера в продължение на 20 минути.

Глюкоза агар Sabouraud: глюкоза 4,0, пептон 1.0, 1.8 агар, 100 мл вода. Avtoklavirovaiiem стерилизира.

Агар Litman с жлъчна говежди: пептон 10.0, глюкоза 10.0, обезводнени жлъчна говежди 15 мл кристалвиолет 0.01, вода 1 литър, агар 20,0. Стерилизирани в автоклав при 1 атмосфера в продължение на 15 минути. * Изсипва в чаши с дебел слой, за да се предотврати обезводняване на околната среда.