Активно пролиферация и nucleolar ракови клетки на гърдата организатор като индикатор на
А ръкопис
Uporov Александър Valerevich
Активност и разпространението КЛЕТКИ YADRSHKOVYH организаторите на рак на гърдата, като показател за биологичното поведение на туморите
14.00.15 - патоанатомия
Изпълнено при im.prof на Институт по Онкология. NN Петров Министерство на здравеопазването на Руската федерация; София
Член на РАН, Доктор по медицина, професор K.M.Pozharissky
Научен ръководител: Доктор по медицина, професор VF Semiglazov
MD, професор E.L.Neyshtadt MD B.M.Ariel
Sofiyaskaya Мечников Медицинска академия
С тезата е наличен в основните библиотеката на Академията
MD
проникване в белязана ДНК прекурсор тъкан - за YuOmkm), която значително влияе на резултатите от изследването.
По този начин, сега са комплекс от методическите, FIR подходи за пълно изследване на пролиферативно състояние на тумора и свързаните с нея условия на неопластични клетки (Степента
1) Изследване на активността пролиферация и NW ракови клетки на гърдата в сравнение "със същите параметри на доброкачествени тумори и не-неопластични лезии на гърдата.
2) сравнително изследване на активността и разпространението на ядрени оръжия в първичен рак на гърдата и повторение и метастазите на регионалните лимфни възли.
4) определяне на фракцията на ракови клетки на гърдата в етапа на синтез на ДНК и митоза и съответно относителната продължителност на фазите на митотичния цикъл
5) определяне на връзката между активността и разпространението на ядрени оръжия в тумори на гърдата
6) Сравнително изследване на РА тумори, използвайки различни пролиферация маркери, за да се избере най-информативни и най-оптимално за широко използване в onkomorfolo-кал изследвания.
Основните разпоредби, които са взети ва защита
1) комбинираната употреба на три маркера на пролиферация (BrdU,
YAAPK и K1-67 антиген), отразявайки различен MTs фаза позволява да се определи индекс на В-фаза и големина на пролиферативно басейна на тумори и за оценка на съотношението на клетки в G-фаза и митоза, съответно, и относителната продължителност на фазите.
2) пролиферация на ефективността, когато се използва три маркера се характеризират с висока (Z - 0.73 - 0.94) надежден пряка връзка.
3) показатели на рак на гърдата 5 пъти, посочени по-горе, в сравнение с доброкачествена и значително увеличаване в повтарящи се тумори, и с увеличаването на степента на злокачественост хистологично PA. ^
4) PA между първичен рак на гърдата и неговите метастази в такива регионални лимфни възли има значителна положителна корелация,
но в повечето случаи показателите на пролиферация в метастатичен по-ниски от първични тумори.
5) В S-фаза на рак на гърдата - най-дългата фаза на МС, който заема около 45% от това на митозни сметки за около 5% от времето. С увеличаване PA рак на гърдата се увеличава относителната продължителност на митоза, относителната дължина на S-фаза остава постоянно.
Nauchvaya Votava. Първо PA провежда задълбочено проучване, оценена чрез включване на BrdU в ДНК, когато се прилага на пациенти ядра на туморни клетки, чрез експресия YAAPK и Ki-67 антиген, и NW активност при рак на гърдата. Ако приемем определението PA • тумор техника, с включване на BrdU в ядрената ДНК по време на репликацията ин виво, с точност експеримент, в сравнение с про-diferativnymi показателите за определени в две други начини, не успя да покаже надежден висока пряка връзка между изследваните маркери за разпространение. Използвайки три пролиферация маркери отразяващи метаболитни събития, настъпили в различни фази MP, направи възможно да се получи S-фаза стойност и индексът на пролиферативно басейн рак на гърдата и за оценка на съотношението на клетки във фазата на синтез на ДНК и митоза и относителната продължителност на тези периоди MC.
Сравнение PA тумори с техните клинични и морфологични характеристики са довели до създаването на нови факти. По този начин, е показано, че повтарящите тумори се характеризират с по-висока клетъчна пролиферация от първичния тумор и метастази в него, напротив, намалява в сравнение с първичен рак на гърдата, въпреки че между техните пролиферативни индекси съхраняват-тивна пряка връзка. PA IPR засилена с растежа на степента на хистологичен злокачествено заболяване. Когато etom'ona gistotipicheskoy свързани с нарушена диференциация на тумора и не отразява цитологични и ядрената атипия, и полиморфизъм (tsitotipicheskaya диференциация).
В настоящото проучване, беше установено, че продължителността на митоза, което отнема средно около 5% от дължината на ПУ, увеличава
ОЗНАЧАВА, във връзка с увеличението на БКП; в същото време продължителността на B-фаза, която заема около половината от ПУ, е постоянна стойност без да се променя в зависимост от размера на пролифериращи клетки.
YAO активност корелира с проценти пролиферация проучени от нас и е ценен характерните структурни и функционални характеристики на тумора.
Praktteskaya значение. Значението на определяне на активността на разпространението на ядрени оръжия и да се оцени степента на злокачественост на рак на гърдата. За да се оцени тумор PA е да се определи оптималната експресия антиген K1-67. Първо, те отразяват най-важният показател на репродуктивни клетки - за нарастване на клетките басейна на тумори. На второ място, използването на този метод не изисква предварително излагане на пациента и дава възможност да се получат пълни резултати в изучаването на архивни материали под формата на парафинови блокчета. Трето, в този метод, не е ясно, високо селективен оцветяване на пролифериращи клетки и тяхното изчисляване е ясна.
YAO активност е важна характеристика на поведението на тумора, като показател за интензивността на рибозомна синтез и ясно корелация с показатели PA може да бъде допълнителна оценка параметър репродуктивната способност на туморни клетки. Освен това, лекотата на определяне на активността на ядрено оръжие позволява да го използвате в патологичните лаборатории и офиси, а не trebuya'spetsialnogo оборудване.
В дисертацията са редица насоки за използването на методите за определяне на БКП и дейността на ядрените оръжия в онкологията и морфология.
Sgarumyaura и обхват на дисертацията. Теза е представен на 208 страници на пишеща машина текст и се състои от въведение, преглед на литературата, описание на материали и техники, резултатите от собствените си изследвания, обсъждане на резултатите, заключенията и списъка с препратки. Хартията съдържа 31 маси, 24 и 19 генерират фотомикрографи. Библиографска индекс включва 289 препратки.
МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ
тумори на гърдата (58 доброкачествени туморни 10, 48 PME, 41 от които sostavil.IPR) са изследвани и тези 15 метастази на тумори на регионалните лимфни възли.
За определяне на индекса на пролиферация (DN) да включи BrdU в ядрата на клетките ин виво за приблизително 1 час. за отстраняване на пациентите с тумор се прилага интравенозно в доза от веществото е 200 мг / м2 телесна повърхност във физиологичен разтвор (СОВ използване в клиничната работа позволено Pharmacological Комитет на RF Minzdravmedprom). Обединен BrdU се определя в парафин секции метод индиректен имунопероксидазен използване на миши моноклонални антитела към халогениран уридин IU-4 (Caltag лаборатория Сан Франциско, Калифорния, САЩ.) При разреждане 1: 250, след като разтворът за денатурация на ДНК -2Н солна киселина.
■■■ ■■ - 8 - '• YAAPK открива в парафин секции immunoleroksidaz Nym индиректен метод, използвайки мишо моноклонално антитяло RS10 (DAKO, Дания) при разреждане 1: 100. Ние използвахме два метода за изчисление: 1) се вземат предвид всички клетки zkspressiruschie YAAPK, 2) клетките се записва само с интензивен експресия на антигена.
Ki-67 антиген се определя в парафин секции от индиректен метод имуно-noperoksidaznym използвайки поликлонален заешки анти-човешки Ki-67 антиген (DAKO, Дания) при разреждане 1: 200 след демаскиране антиген чрез кипене секции в тенджера под налягане в цитратен буфер.
PA клетки се определя чрез преброяване на клетки и SH1 1000-150Ö изразява като процент. В допълнение, митотични фигури преброяват сред Ki-67-позитивни клетки (MIT) и резултатите са изразени като процент.
Относителната продължителността на S-фаза. U произведен от формула К. Sasaki и сътр. (1988):
SP NOS относителната продължителност на S-фаза х 1OOZ
SP Ki-67 MP относителната продължителност относителната продължителност на митоза с формулата: __ MIT относителната продължителност на митоза х 100% Ki-67 SP - • относителната продължителност MC argentophile киселинните протеини, свързани с групи Яо оцветени по метода и WMHowell DABlack (1980 ) модификация HHMamaeva и сътр. (1984). Отчита брой нуклеоли и сребърни зърна в нуклеолата и karyoplasm 1! 00-150 ядрата на туморни клетки.
Резултати и обсъждане
Данните, получени с използване на 3 "различни маркери на клетъчна пролиферация показва, че PA PMS клетки приблизително 5 пъти по-висока от тази на доброкачествени тумори (Таблица 1) Нашият наблюдение потвърждава данните от литературата (Lelle RJ et AL, 1987; .. Dervan PA и сътр. ; .. Wintzer N.-O. и др), обаче, се обръща внимание голямо разпространение на рак на гърдата клетки PA стойности от ниски стойности не надвишават тези на доброкачествени тумори, до много високи стойности, равни на 65-68% клетка зало- "pulyatsii настоящото. наблюдение подчертава изразен права gennost рак на гърдата, които трябва да бъдат взети под внимание при определяне на прогнозата
Таблица 1. пролиферативна активност на гърдата туморни клетки.
Marker Index тест на Mann-Whitney
пролиферация proliferatsiiD стр
Включване БРАШНО 1.97 (0.80 - 4,90) 10,95 (2,20 - 26,90) 0.000002
Изразяване YAAPK: -general 30,11 (11,57 - 54,78) • 44,87 (23,19 - 67,58) 0005
-Интензивно 6.21 (1.08 - 13,79) 25,71 (7,50 - 53,70) 0.000003
Експресия K1-67 4.75 (1.60 - 11,76) 24,89 (8,64 - 65,16) 0.000001
Таблица 2 пролиферативна активност на инвазивен рак на гърдата, дуктален зависимост от GPA тумор.
Индикатор SP (NOS), стр. ISchYaAPKobsch); р SP (YaAPKint); ISCH K1-67 р) р
Степента на хистологичен злокачественост:% I 6,08 II 9,60 III 15,27% 0,0001% 35,54% 50,86% 50,31% 15,21% 29,08 0.001% 34,19% 0,0001 14,27% 22,18% 36,11% 0.00001
Способността да образуват тръбни структури: средната -висока Ниска% 6,32% 14,00% 7,91 0,002 - 36,66% 38,86% 50,93% 0.002. 15,06% 19,44% 33,52% 0,0001. 13,89% 18,15% 33,40% 0,0004
Митотичната активност; -ниска средната -висока 5,95% 9,53% 15,60% 36,66% 48,68% 0.0001 0.0005 51,02% 15,61% 27,69% 35,49% 0, 0003 14,82% 23,64% 34,81% 0,0002
Ядрената атипия т полиморфизъм: Ниска -means -Високо 5,82% 11,45% 11,54% 0,34 32,83% 46,19% 47,56% 0,04 14,13% 27,88% 27 94 13.24% 0.04% 26,29% 28,40% 0,05
Забележка: В таблицата са представени средните стойности на БКП показатели. р-средната тест.
Ние също не показват връзката между РА и ФМИ клетки, засегнати от присъствието на регионални метастази на лимфен възел (р-БРАШНО 0.2 до 0.2 и р за Ki-67 антиген; Mann-Whitney тест). Същите резултати бяха получени от други (Ashton-Key М. и др. Pinder S.E. и др.. Pietilainen Т. и др). Вероятно метастаза FWffi по-силно повлияни от други фактори, като промени в клетъчната адхезия, извънклетъчна матрица състояние (Pietilainen Т. и др.), Ензимни клетъчна инвазия фактори, активност и неоангиогенеза drugie►
Доколкото ни е известно, няма връзка между БКП рак на гърдата клетки и инвариант-агресивни туморни потенции.
PA показатели на тумори на гърдата, както е определено чрез пролиферация маркери 3, имат висока степен на корелация (Таблица 3). От една страна, това го прави по-разумни модели, които открихме. От друга страна, висока корелация между индикаторите, които отразяват различните фази на КН, предполага преминаване фаза рак MC клетки без блок във всяка от тях.
Ние получава относителната продължителност на S-фаза клетки FMK равно 44.64 (24.40 - 89.21)% МС, обикновено в близост до K.Sasaki води и др. (1988) - 0.58 + 0.28. Според нашите данни, относителната продължителност на митозни RMYA клетки е 5.04 (1.00 -11.20)% МС. В този случай, ние открихме, че относителната продължителност на митоза, значително увеличава с клетката PA, при поддържане на постоянна дължина на S-фаза. Това може да се отнася до: 1) клетки забавяне на митоза ", или 2) пропорционално намаление на Si
02 и S-фаза, докато се поддържа по време на митоза (McGurrin J.F. минути и др. 1987). Публикуваните данни по този въпрос са оскъдни и противоречиви. Предвид тези I.A.Alova (1972) показва, че истинската удължение митоза се дължи на забавянето на туморни клетки в метафаза поради счупване тиол механизъм на клетъчно делене.
Според нашите данни, стойностите на всички параметри YAO активност, с изключение на броя на нуклеоли о-, RSH в клетки е значително по-високи, отколкото в доброкачествени клетки (Таблица 4), което съответства на данните на други aBTopoB (Smith I.i Крокър J .; Dervan PA и др.). Въпреки това, размерът на припокриване на стойности сребърни гранули в доброкачествени и злокачествени тумори прави невъзможно използването на индикатор YAO активност като абсолютен критерий за диференциална диагноза на тези тумори.
Брой vnutryadryshkovyh гранули и общото количество сребро в сърцевината на гранулите е в същата връзка с клинични и анатомични характеристики GPA ASI RSH че всички показатели
Таблица 3. Корелационните коефициенти между показатели SHZH клетъчна пролиферация с помощта на различни маркери (Тест Spirmona ранг корелация, R).